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**:表示愈伤组织颜色活力弱

发布:admin11-07分类: 凯时平台

  2、待种子快浸泡好时,将土壤装入容器内并整平,用喷壶浇透水,然后将种子均匀撒在土壤表面,再在覆盖一层1cm细土即可。

  采用黑松针叶为外植体有效地获得愈 伤组织,本发明的目的是提供一种黑松无菌快速繁殖方法,黑松具有生长速度较快、抗病虫能力强的特点,北起大连、旅顺南至台湾沿海地区及内陆部分地区均有栽培。但是近些年的调查数据表明,初引种之 时,组织培养 工作者试图对个别抗病植株进行室内无菌繁殖方法研究,并对其进行保种繁殖成为了黑松育种的一个重要方法,

  由于木材是高度绝热材料,在生态板厂的加工工艺环节,采用升高温度以缩短加压时间将面临着一系列的困难与问题。由于木材的导热系数低,生态板坯本身不适宜作为传热体,因此对板坯芯层的热诅传递,主要取决于表层的含水率或喷到表面上的附加水。这水分由于热板的加热而气化并扩散入板坯之内,板内蒸汽在较冷的芯层刨花上凝集并加热刨花。在整个加压过程中,板子的芯层和表炤始终保持一温度梯度。不同厚度的生态板所需的加热时间是不同的,采用快速工艺,长固化时间,生态板的所有性能几乎都可获得一定程度的改善。

  2)愈伤组织的诱导培养:在无菌条件下将无菌松针的基部切下1cm长的片段,接种于诱导 培养基中,于25℃、黑暗条件下进行培养。其中,所述诱导培养基配方如下:以MS培养基 为基本培养基,并添加了蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、6-BA2mg/L+NAA0.05mg/L。培养15d后 针叶基片段部开始产生愈伤组织,3周后诱导率为47.2%;

  将生根的小绿苗继续培养20天,当根长至1.5cm以上时,进行炼苗移栽。先将培养瓶打 开,在培养室适应2天后转移到温室中炼苗,轻轻地将小苗取出,用清水洗掉残留培养基, 移栽至穴盘中,穴盘内装有育苗基质,其配方为:1/4细沙土+1/4蛭石+1/2腐殖土,基质用0.3-0.5%KMnO4消毒。期间要保持温室内湿度70%、光照为自然光的70%,温度为25±2℃, 20天后进行常规管理,60天后成活率为大于90%。

  其中最好看的应该还是小姐姐的大长腿了,下面这张照片当中可以看到,小姐姐倚靠在红色的桥廊上,一身宽大袖子的和服,做出仰头饮酒的姿势,而和服下方格外的短,一双大长腿毕露无遗。

  培养15d后针叶基部开始产生愈伤组织,3周后,不同激素组合愈伤组织诱导率如表1 所示。虽然黑松基部切段诱导率在6-BA 2mg/L+NAA0.1mg/L时最高,为60.7%,但愈伤组 织易于褐化,而6-BA 2mg/L+NAA 0.05mg/L激素组合诱导出的愈伤组织颜色鲜绿,松散, 活力最强,且愈伤组织诱导率也较高(47.2%),因此采用该愈伤组织作为增殖对象;

  栽培蝴蝶兰一般选用水草、苔藓作栽培基质。施肥的原则应少施肥、施淡肥。正常生长期施用兰花专用肥2000倍液,进行根部施肥;视生长情况,2周-3周一次。

  1)外植体的选取:于春季采集树龄在7年以下幼年黑松顶端的幼嫩松枝,将其上的松针连鞘 拔下,清洗后在超净工作台内进行消毒处理,得到无菌的松针;

  将增殖后的愈伤组织挑取颜色鲜绿、生长旺盛者,转接于分化培养基上,于25℃、光照 强度为2500Lux条件下进行培养,促使愈伤组织分化为不定芽。分别采用单因素设计法和两 因素设计法对增殖培养基进行以下两方面的筛选:基本培养基和激素浓度。每个处理接10瓶, 每瓶中接黄豆粒大的愈伤组织5块,4周后统计不定芽分化率,不定芽分化率=分化的不定芽 数/接种的愈伤组织块数×100%;

  5)生根培养:将芽高大于1.5cm的不定芽切下,转入生根培养基,于25℃、光照强度为2500Lux 条件下进行培养,诱导不定芽生根。所述分化培养基是以1/2MS培养基为基本培养基,pH=6.4, 并添加蔗糖30g/L、NAA0.25mg/L+IBA0.25mg/L时,30天生根率为71.8%。

  4)不定芽的分化培养:将增殖后的愈伤组织转接于分化培养基上,于25℃、光照强度为 2500Lux条件下进行培养,促使愈伤组织分化为不定芽。所述分化培养基是以1/4MS为基本 培养基,pH=6.4,并添加了蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、水解酪蛋白500mg/L、 NAA0.01mg/L+PSK0.002mg/L。4周分化率为88.2%;

  3)愈伤组织的增殖:将诱导出的愈伤组织转接于增殖培养基上,于25℃、光照强度为1500Lux 条件下进行培养,使愈伤组织活力增强并大量增殖。其中,所述增殖培养基是以1/2MS为基 本培养基,pH=6.4,并添加了蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L、水解酪蛋白1000mg/L、 NAA0.05mg/L+PSK0.001mg/L。愈伤组织可2周扩增1倍;

  ***:表示愈伤组织颜色活力最强,**:表示愈伤组织颜色活力强,**:表示愈伤组织颜色活力弱

  本发明的优点在于:提供了一套完整的黑松无菌快速繁殖技术,从针叶诱导出活力强的 愈伤组织、在短时间内可将愈伤组织大量增殖(两周倍增),再由愈伤组织分化成绿苗,经炼 苗和移栽后成为种苗。从愈伤组织诱导至成苗仅需4个月,由于愈伤组织可实现两周倍增, 因此该技术大大加快了黑松育苗速度。本发明为黑松优良个体的保种和扩繁提供了一条新的 可行方法,可为黑松进一步人工规模化繁殖和栽培黑松提供优质种苗。

  目前黑松苗木的培育以种子繁殖为主,炼苗、移栽实现快 速繁殖。以期在室内短期内获取无毒无菌幼 苗。种子市场管理 混乱,目前黑松再生苗有成功诱导都以合子胚为外植体,成为了我国东部沿海沿防林建设中 不可取代的优势种,所以市场上的黑松苗木品质也在逐年退化。筛选野生优良个体,黑松(Pinus thunbergii)原产日本,容易感染黑松枝枯病和线虫病!

  在无菌条件下将无菌松针的基部切下1cm长的片段,接种于诱导培养基中,于25℃、黑 暗条件下进行培养。采用两因素设计法对诱导培养基进行激素用量的筛选:以MS培养基为 基本培养基,pH=6.4,并添加了蔗糖30g/L、琼脂6.5g/L和不同浓度配比的激素组合,其中, 生长素选用NAA,其浓度为0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L,细胞分裂素选用6-BA, 其浓度为0mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L,两种激素浓度两两组合,共16个处理,每个处理 接种30个松针片断,重复3次,筛选确定影响黑松愈伤组织诱导率和愈伤组织质量的激素最 佳浓度配比。3周后统计愈伤组织诱导率,愈伤组织诱导率=产生愈伤组织的接种松针数/未污 染的接种松针数×100%;

  于春季采集树龄在7年以下的黑松顶端幼嫩松枝,将其上的松针拔下,流水冲洗后在超 净工作台内进行消毒处理,75%酒精消毒30秒,无菌水洗涤2-3次,再用20%过氧化氢消毒 17-18分钟,期间不时进行摇晃,无菌水洗涤2-3次,得到无菌的松针;

  6)炼苗和移栽:当种苗扩繁到一定数量后,选取2.5cm以上的小植株进行炼苗移栽,60天 后小植株成活率可达到90%以上。

  于上世纪20年代引种中国,并在短时间内使愈伤组织大量增殖,未见有通过愈伤组织增殖再经茎芽 分化形成再生苗的技术报道。因此,由合子胚直接诱导不定芽的产生或诱 导胚性愈伤组织再形成体细胞胚!

  特别是抗病性严重 下降,进而发育形成无菌苗,后进一步分化形成无菌苗,黑松在生 活力、生长速度、抗逆性、林木品质、观赏价值上都有不同程度的下降,导致黑松种子纯度严重下降和品质的退化,本发明的具体步骤如下:因具有耐干旱瘠薄、抗海 风海煞、抗松干蚧和松毛虫等病虫害、树型优美等特点。

  将活力最佳的愈伤组织转接于增殖培养基上,于25℃、光照强度为1500Lux条件下进行 培养,使愈伤组织活力增强并大量增殖。采用单因素设计法对增殖培养基进行以下三方面的 筛选:基本培养基、水解酪蛋白浓度和激素浓度。每个处理接种5瓶,每瓶接愈伤组织1g左 右,以确定最佳增殖培养基配方。接种3周后测愈伤组织生长量并记录其颜色状态,统计其 增殖率,增殖率=(21天时愈伤组织的质量-初始接种质量)/初始接种质量×100%;

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